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작성자 관리자
제 목 간암 모델에서 SB 주사액의 효능 평가

아래는 인하대학교 의과대학 부속병원에서 실시한 간암 모델에서

에스비주사의 효능을 평가한 연구결과 내용입니다.

 

연구개발 결과

 

(1) MTT assay를 이용한 SB주사액의 세포성장 저해효과 결과

SB 주사액을 대표적인 간암세포주인 HepG2와 Huh-7에 처리하였을 때

농도 의존적으로 세포의 성장을 저해하였고, Huh-7세포에서는 50 ug/ml

이하에서, HepG2세포에서는 120 ug/ml 근처에서 IC50값을 보였다.


 

 

(2) 혈관 신생 인자인 VEGF의 mRNA 발현 (RT-PCR)

혈관신생(angiogenesis)은 모세혈관내피세포의 증식으로, 여러 종양의 발생,

성장뿐만 아니라 전이에까지 중요한 영향을 미친다. 종양세포에서 분비되는

혈관신생물질은 paracrine manner로 혈관내피세포에 작용하여 내피세포의

증식, 종양세포의 침윤을 유도하여 종양혈관형성에 관여하는데

혈관신생요소(angiogenic factor)로서 platelet-derived growth factor

(PDGF), basic fibroblastic growth factor(bFGF) 및 vascular

endothelial growth factor(VEGF), epidermal growth factor 및

transforming growth factor β 등이 알려져 있다. 이 중에 대표적인

혈관 신생 인자인 VEGF의 발현에 미치는 영향을 알아보았다. hypoxia를

mimic할 수 있는 Co를 처리하였을 때 control에 비해 VEGF량이 증가하였고,

SB 주사액을 처리하였을 때 SB 100 ug/ml 이상의 농도로 처리하였을 때

VEGF 발현량이 현저히 감소되고 있음을 확인하였다.   


 

(3) DAPI staining과 TUNEL staining 결과

 

SB 주사액의 세포 사멸 효과를 규명하기위해 4,6-diamidineo-2-

phenylindole (DAPI), terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-

mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) 염색법으로 세포의 형태학적

특성을 관찰하였다. 세포는 four-chamber slide에서 배양되었고 SB 주사액

100 μg/ml을 24 시간 동안 처리하였다. DAPI는 DNA와 결합하는 형광 물질로서,

사멸되는 세포의 핵의 형태학적 관찰을 가능하게 한다.

DAPI 용액으로 염색된 세포는 형광 현미경으로 관찰되었다. SB 주사액이

처리된 세포군에서 세포핵이 응축되어 쪼개지는 것을  관찰 할 수 있었는데,

이는 apoptosis가 일어나는 세포들의 전형적인 형태학적 특징이라 할 수 있다.

또한 SB 주사액에 의한 apoptosis의 유발은 TUNEL 염색법을 통해 관찰 되었다.

TUNEL은 apoptosis 동안 일어나는 DNA 가닥의 깨짐을 표지하는 실험 방법으로서

SB 주사액으로 처치된 세포군에서 보여지는 어두운 갈색이 깨진 DNA의

응축을 나타낸다. 형태학적, 생화학적 실험 결과들을 볼 때,  SB 주사액

(100 ug/ml)는 사람 간암 세포, Huh-7에서 크로마틴을 응축시키는 등 

전형적인 세포사멸 과정의 특징들을 나타냈다.


(4) 간암 xenograft model에서  SB 주사액의 항암 효과 실험 결과

Huh7 인체 암세포주를 nude mouse에 이식한 후 SB주사제를 처리하였고,

대조 약물로는 Sorafenib을 처리하고 17일동안 nude mouse의 tumor size와

몸무게 변화를 관찰하였다. 모든 시험군에서 매일 16회동안 처리하는 과정에

걸친 약물 처리에 의해 체중이 다소 감소했지만 대조군에 비해 시험군, 양성

대조군 모두 통계학적으로 유의적인 차이는 없었다 (유의수준 p < 0.05).

이는 본 투여방법에 의한 약물 독성은 없음을 보여주고 있다.

SB주사액 125, 250mg/kg에서 Control에 비해 70~80% 높은 tumor 성장

억제 효과를 보였고 SB주사액 125mg/kg 처리시 positive control인

Sorafenib(10 mg/kg)의 효과와 비슷하였고, 250 mg/kg 처리 시에는

항암효과가 그보다 더 강했다.

이상의 결과를 요약하면 SB주사제는 치사량보다 낮은 약물농도에서 인체

간암인 Huh7의 종양형성저해효과를 갖고 있으며 이 효과는 용량의존적인

특성이 있었다. SB주사제를 16일 동안 매일 복강투여한 후 그 다음날 Huh7의

종양을 절제하여 그 무게를 측정하였을 때, 종양의 무게는 SB주사제를

125mg/kg 으로 복강 주사하였을 경우 약 40%의 성장억제 효과를 나타

내었으며, SB주사제를 250mg/kg 으로 복강주사하였을 경우 약 80%의

성장억제 효과를 나타내었다.

 

고찰

SB 주사액을 125 mg/kg, 250 mg/kg로 투여하였을 때 간암 성장을 억제하고

있음을 확인하였고, 양성 대조 물질인 Sorafenib 10mg/kg의 효과와 비슷한

효능을 보이고 있었다. In vitro 세포 실험에 근거해서 고찰하면 SB 주사액은

간암세포의 apoptosis를 유도하고, 혈관신생을 억제하는 기전에 의해 암세포의

성장을 억제하는 것으로 사료되었다. 본 실험에서 사용한 용량으로 임상에서

SB 주사액이 폐암, 대장암에서도 뛰어난 치료 효능을 발휘한 것처럼 SB

주사액은 간암 환자의 치료에도 효능을 보이리라 생각되었다.

 

 

 

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